性病研究实验室试验是用心磷脂、卵磷脂及胆固醇为抗原，可作定量及定性试验，试剂及对照血清已标准化，费用低。此法常用，操作简单，需用显微镜读取结果，缺点是一期梅毒敏感性不高。用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，亦称反应素。本试验敏感性高而特异性较低，且易发生生物学假阳性。早期梅毒患者经充分治疗后，反应素可以消失，早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可以减少或消失。目前一般作为筛选和定量试验，观察疗效，复发及再感染。
梅毒螺旋体不能够在体外培养，也不能用常规方法染色。实验室常用的检测方法包括典型溃疡处查找梅毒螺旋体和检测血清中抗体的存在。不同的感染阶段应选用不同的实验室方法，溃疡并不是出现于疾病任何阶段，而抗体一般在溃疡形成后1～4周出现。